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顯微鏡的構(gòu)造及其使用方法 - 分析行業(yè)新聞
來源: | 發(fā)布日期:2023-02-26 16:07
 

■中文名稱
顯微鏡
■英文名稱
microscope
■儀器概述
顯微鏡是由一個透鏡或幾個透鏡的組合構(gòu)成的一種光學(xué)儀器。是人類進(jìn)入原子時代的標(biāo)志。用于放大微小物體成為人的肉眼所能看到的儀器。顯微鏡分光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡。光學(xué)顯微鏡是在1590年由荷蘭的楊森父子所首創(chuàng)。現(xiàn)在的光學(xué)顯微鏡可把物體放大1500倍,分辨的*小極限達(dá)0.2微米。

光學(xué)顯微鏡的種類很多,除一般的外,主要有:①暗視野顯微鏡,一種具有暗視野聚光鏡,從而使照明的光束不從中央部分射入,而從四周射向標(biāo)本的顯微鏡。②熒光顯微鏡,以紫外線為光源,使被照射的物體發(fā)出熒光的顯微鏡。電子顯微鏡是在1931年在德國柏林由克諾爾和哈羅斯卡首先裝配完成的。這種顯微鏡用高速電子束代替光束。由于電子流的波長比光波短得多,所以電子顯微鏡的放大倍數(shù)可達(dá)80萬倍,分辨的*小極限達(dá)0.2納米。1963年開始使用的掃描電子顯微鏡更可使人看到物體表面的微小結(jié)構(gòu)。
■主要用途
顯微鏡被用來放大微小物體的像。一般應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、微觀粒子等觀測。

【儀器結(jié)構(gòu)】
■光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)
普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造主要分為三部分:機(jī)械部分、照明部分和光學(xué)部分。
◆機(jī)械部分
(1)鏡座:是顯微鏡的底座,用以支持整個鏡體。
(2)鏡柱:是鏡座上面直立的部分,用以連接鏡座和鏡臂。
(3)鏡臂:一端連于鏡柱,一端連于鏡筒,是取放顯微鏡時手握部位。
(4)鏡筒:連在鏡臂的前上方,鏡筒上端裝有目鏡,下端裝有物鏡轉(zhuǎn)換器。
(5)物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)器):接于棱鏡殼的下方,可自由轉(zhuǎn)動,盤上有3-4個圓孔,是安裝物鏡部位,轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器,可以調(diào)換不同倍數(shù)的物鏡,當(dāng)聽到碰叩聲時,方可進(jìn)行觀察,此時物鏡光軸恰好對準(zhǔn)通光孔中心,光路接通。
(6)鏡臺(載物臺):在鏡筒下方,形狀有方、圓兩種,用以放置玻片標(biāo)本,中央有一通光孔,我們所用的顯微鏡其鏡臺上裝有玻片標(biāo)本推進(jìn)器(推片器),推進(jìn)器左側(cè)有彈簧夾,用以夾持玻片標(biāo)本,鏡臺下有推進(jìn)器調(diào)節(jié)輪,可使玻片標(biāo)本作左右、前后方向的移動。
(7)調(diào)節(jié)器:是裝在鏡柱上的大小兩種螺旋,調(diào)節(jié)時使鏡臺作上下方向的移動。
①粗調(diào)節(jié)器(粗螺旋):大螺旋稱粗調(diào)節(jié)器,移動時可使鏡臺作快速和較大幅度的升降,所以能迅速調(diào)節(jié)物鏡和標(biāo)本之間的距離使物象呈現(xiàn)于視野中,通常在使用低倍鏡時,先用粗調(diào)節(jié)器迅速找到物象。
②細(xì)調(diào)節(jié)器(細(xì)螺旋):小螺旋稱細(xì)調(diào)節(jié)器,移動時可使鏡臺緩慢地升降,多在運(yùn)用高倍鏡時使用,從而得到更清晰的物象,并借以觀察標(biāo)本的不同層次和不同深度的結(jié)構(gòu)。
◆照明部分
裝在鏡臺下方,包括反光鏡,集光器。
(1)反光鏡:裝在鏡座上面,可向任意方向轉(zhuǎn)動,它有平、凹兩面,其作用是將光源光線反射到聚光器上,再經(jīng)通光孔照明標(biāo)本,凹面鏡聚光作用強(qiáng),適于光線較弱的時候使用,平面鏡聚光作用弱,適于光線較強(qiáng)時使用。
(2)集光器(聚光器)位于鏡臺下方的集光器架上,由聚光鏡和光圈組成,其作用是把光線集中到所要觀察的標(biāo)本上。
①聚光鏡:由一片或數(shù)片透鏡組成,起匯聚光線的作用,加強(qiáng)對標(biāo)本的照明,并使光線射入物鏡內(nèi),鏡柱旁有一調(diào)節(jié)螺旋,轉(zhuǎn)動它可升降聚光器,以調(diào)節(jié)視野中光亮度的強(qiáng)弱。
②光圈(虹彩光圈):在聚光鏡下方,由十幾張金屬薄片組成,其外側(cè)伸出一柄,推動它可調(diào)節(jié)其開孔的大小,以調(diào)節(jié)光量。
◆光學(xué)部分
(1)目鏡:裝在鏡筒的上端,通常備有2-3個,上面刻有5×、10×或15×符號以表示其放大倍數(shù),一般裝的是10×的目鏡。
(2)物鏡:裝在鏡筒下端的旋轉(zhuǎn)器上,一般有3-4個物鏡,其中*短的刻有“10×”符號的為低倍鏡,較長的刻有“40×”符號的為高倍鏡,*長的刻有“100×”符號的為油鏡,此外,在高倍鏡和油鏡上還常加有一圈不同顏色的線,以示區(qū)別。
顯微鏡的放大倍數(shù)是物鏡的放大倍數(shù)與目鏡的放大倍數(shù)的乘積,如物鏡為10×,目鏡為10×,其放大倍數(shù)就為10×10=100。

■電子顯微鏡結(jié)構(gòu)
電子顯微鏡由鏡筒、真空系統(tǒng)和電源柜三部分組成。鏡筒主要有電子槍、電子透鏡、樣品架、熒光屏和照相機(jī)構(gòu)等部件,這些部件通常是自上而下地裝配成一個柱體;真空系統(tǒng)由機(jī)械真空泵、擴(kuò)散泵和真空閥門等構(gòu)成,并通過抽氣管道與鏡筒相聯(lián)接;電源柜由高壓發(fā)生器、勵磁電流穩(wěn)流器和各種調(diào)節(jié)控制單元組成。
◆電子透鏡
電子透鏡是電子顯微鏡鏡筒中*重要的部件,它用一個對稱于鏡筒軸線的空間電場或磁場使電子軌跡向軸線彎曲形成聚焦,其作用與玻璃凸透鏡使光束聚焦的作用相似,所以稱為電子透鏡?,F(xiàn)代電子顯微鏡大多采用電磁透鏡,由很穩(wěn)定的直流勵磁電流通過帶極靴的線圈產(chǎn)生的強(qiáng)磁場使電子聚焦。
◆電子槍
電子槍是由鎢絲熱陰極、柵極和陰極構(gòu)成的部件。它能發(fā)射并形成速度均勻的電子束,所以加速電壓的穩(wěn)定度要求不低于萬分之一。

【成像原理】
■光學(xué)顯微鏡成像原理
當(dāng)把待觀察物體放在物鏡焦點(diǎn)外側(cè)靠近焦點(diǎn)處時,在物鏡后所成的實(shí)像恰在目鏡焦點(diǎn)內(nèi)側(cè)靠近焦點(diǎn)處,經(jīng)目鏡再次放大成一虛像。觀察到的是經(jīng)兩次放大后的倒立虛像。

■電子顯微鏡成像原理
電子顯微鏡是根據(jù)電子光學(xué)原理,用電子束和電子透鏡代替光束和光學(xué)透鏡,使物質(zhì)的細(xì)微結(jié)構(gòu)在非常高的放大倍數(shù)下成像的儀器。
電子顯微鏡的分辨能力以它所能分辨的相鄰兩點(diǎn)的*小間距來表示。20世紀(jì)70年代,透射式電子顯微鏡的分辨率約為0.3納米(人眼的分辨本領(lǐng)約為0.1毫米)?,F(xiàn)在電子顯微鏡*大放大倍率超過300萬倍,而光學(xué)顯微鏡的*大放大倍率約為2000倍,所以通過電子顯微鏡就能直接觀察到某些重金屬的原子和晶體中排列整齊的原子點(diǎn)陣。

【修理維護(hù)】
■顯微鏡的維護(hù)

1、經(jīng)常性的維護(hù)
(1)防潮如果室內(nèi)潮濕,光學(xué)鏡片就容易生霉、生霧。鏡片一旦生霉,很難除去。顯微鏡內(nèi)部的鏡片由于不便擦拭,潮濕對其危害性更大。機(jī)械零件受潮后,容易生銹。為了防潮,存放顯微鏡時,除了選擇干燥的房間外,存放地點(diǎn)也應(yīng)離墻、離地、遠(yuǎn)離濕源。顯微鏡箱內(nèi)應(yīng)放置1~2袋硅膠作干燥劑。并經(jīng)常對硅膠進(jìn)行烘烤。在其顏色變粉紅后,應(yīng)及時烘烤,烘烤后再繼續(xù)使用。

(2)防塵光學(xué)元件表面落入灰塵,不僅影響光線通過,而且經(jīng)光學(xué)系統(tǒng)放大后,會生成很大的污斑,影響觀察?;覊m、砂粒落入機(jī)械部分,還會增加磨損,引起運(yùn)動受阻,危害同樣很大。因此,必須經(jīng)常保持顯微鏡的清潔。

(3)防腐蝕 顯微鏡不能和具有腐蝕性的化學(xué)試劑放在一起。如硫酸、鹽酸、強(qiáng)堿等。

(4)防熱 防熱的目的主要是為了避免熱脹冷縮引起鏡片的開膠與脫落。

2、光學(xué)系統(tǒng)的擦拭
平時對顯微鏡的各光學(xué)部分的表面,用干凈的毛筆清掃或用擦鏡紙擦拭干凈即行。在鏡片上有抹不掉的污物、油漬或手指印時,鏡片生霉、生霧以及長期停用后復(fù)用時,都需要先進(jìn)行擦拭再使用。
(1)擦拭范圍 目鏡和聚光鏡允許拆開擦拭。物鏡因結(jié)構(gòu)復(fù)雜,裝配時又要專門的儀器來校正才能恢復(fù)原有的精度,故嚴(yán)禁拆開擦拭。
拆卸目鏡和聚光鏡時,要注意以下幾點(diǎn):
a、小心謹(jǐn)慎。
b、拆卸時,要標(biāo)記各元件的相對位置(可在外殼上劃線作標(biāo)記)、相對順序和鏡片的正反面,以防重裝時弄錯。
c、操作環(huán)境應(yīng)保持清潔、干燥。拆卸目鏡時,只要從兩端旋出上下兩塊透鏡即可。目鏡內(nèi)的視場光欄不能移動。否則,會使視場界線模糊。聚光鏡旋開后嚴(yán)禁進(jìn)一步分解其上透鏡。因其上透鏡是油浸的,出廠時經(jīng)過良好的密封,再分解會破壞它的密封性能而損壞。

2.擦拭方法先用干凈的毛筆或吹風(fēng)球除去鏡片表面的灰塵。然后用干凈的絨布從鏡片中心開始向邊緣作螺旋形單向運(yùn)動。擦完一次把絨布換一個地方再擦,直至擦凈為止。如果鏡片上有油漬、污物或指印等擦不掉時,可用柳枝條裹上脫脂棉,蘸少量酒精和乙醚混合液(酒精80%,乙醚20%)擦拭。如果有較重的霉點(diǎn)或霉斑無法除去時,可用棉簽蘸水潤濕后粘上碳酸鈣粉(含量為99%以上)進(jìn)行擦拭。擦拭后,應(yīng)將粉末清除干凈。鏡片是否擦凈,可用鏡片上的反射光線進(jìn)行觀察檢查。要注意的是,擦拭前一定要將灰塵除凈。否則,灰塵中的砂粒會將鏡面劃起溝紋。不準(zhǔn)用毛巾、手帕、衣服等去擦拭鏡片。酒精乙醚混合液不可用的太多,以免液體進(jìn)入鏡片的粘接部使鏡片脫膠。鏡片表面有一層紫藍(lán)色的透光膜,不要誤作污物將其擦去。

3、機(jī)械部分的擦拭
表面涂漆部分,可用布擦拭。但不能使用酒精、乙醚等有機(jī)溶劑擦,以免脫漆。沒有涂漆的部分若有銹,可用布蘸汽油擦去。擦凈后重新上好防護(hù)油脂即可。

■機(jī)械裝置故障的排除
1、粗調(diào)部分故障的排除
粗調(diào)的主要故障是自動下滑或升降時松緊不一。所謂自動下滑是指鏡 ??????y????????V3910 筒、鏡臂或載物臺靜止在某一位置時,不經(jīng)調(diào)節(jié),在它本身重量的作用下,自動地慢慢落下來的現(xiàn)象。其原因是鏡筒、鏡臂、載物臺本身的重力大于靜摩擦力引起的。解決的辦法是增大靜摩擦力,使之大于鏡筒或鏡臂本身的重力。

對于斜筒及大部分雙目顯微鏡的粗調(diào)機(jī)構(gòu)來說,當(dāng)鏡臂自動下滑時,可用兩手分別握往粗調(diào)手輪內(nèi)側(cè)的止滑輪,雙手均按順時針方向用力擰緊,即可制止下滑。如不湊效,則應(yīng)找專業(yè)人員進(jìn)行修理。

鏡筒自動下滑,往往給人以錯覺,誤認(rèn)為是齒輪與齒條配合的太松引起的。于是就在齒條下加墊片。這樣,鏡筒的下滑雖然能暫時止住,但卻使齒輪和齒條處于不正常的咬合狀態(tài)。運(yùn)動的結(jié)果,使得齒輪和齒條都變形。尤其是墊得不平時,齒條的變形更厲害,結(jié)果是一部分咬得緊,一部分咬得松。因此,這種方法不宜采用。

此外,由于粗調(diào)機(jī)構(gòu)長久失修,潤滑油干枯,升降時會產(chǎn)生不舒服的感覺,甚至可以聽到機(jī)件的摩擦聲。這時,可將機(jī)械裝置拆下清洗,上油脂后重新裝配。

2、微調(diào)部分故障的排除
微調(diào)部分*常見的故障是卡死與失效。微調(diào)部分安裝在儀器內(nèi)部,其機(jī)械零件細(xì)小、緊湊,是顯微鏡中*精細(xì)復(fù)雜的部分。微調(diào)部分的故障應(yīng)由專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行修理。沒有足夠的把握,不要隨便亂拆。

3、物鏡轉(zhuǎn)換器故障的排除
物鏡轉(zhuǎn)換器的主要故障是定位裝置失靈。一般是定位彈簧片損壞(變形、斷裂、失去彈性、彈簧片的固定螺釘松動等)所致。更換新彈簧片時,暫不要把固定螺釘旋緊,應(yīng)按本節(jié)“三(二)2”先作光軸校正。等合軸以后,再旋緊螺絲。若是內(nèi)定位式的轉(zhuǎn)換器,則應(yīng)旋下轉(zhuǎn)動盤中央的大頭螺釘,取下轉(zhuǎn)動盤,才能更換定位彈簧片,光軸校正的方法與前面相同。

4、聚光器升降機(jī)構(gòu)故障的排除
這部分的主要故障也是自動下滑。排除方法如下:
(1)直筒顯微鏡聚光器的升降機(jī)構(gòu)如圖10-3-2所示:1. 5.賽璐珞墊圈 2.大頭螺釘 3.偏心式齒桿套 4.齒桿 6.升降手輪 7.雙眼螺母
調(diào)整時,一只手用雙眼螺母扳手插入手輪端面上的雙眼螺母內(nèi),另一只手用螺絲刀插入另一端的大頭螺釘槽口內(nèi),用力旋緊即可制止下滑。
(2)斜筒顯微鏡聚光器的升降機(jī)構(gòu)如圖10-3-3所示:
調(diào)整時,首先用螺絲刀把雙眼螺母中間的駐螺2退出1~2圈,軸承墊圈3是與駐螺2壓緊配合的,因此,也會跟著它一起退出,并脫離齒桿10的端面。然后,用雙眼螺母扳手把雙眼螺母1向調(diào)節(jié)座5旋進(jìn)。同時,用另一只手轉(zhuǎn)動手輪,進(jìn)行試驗(yàn),直到升降機(jī)構(gòu)松緊合適,又能停留在任意位置上時,才停止雙眼螺母的旋進(jìn)。*后,再把駐螺旋入,使軸承墊圈接觸齒桿10就行了。

這樣調(diào)整之所以能夠排除故障,是因?yàn)檎{(diào)節(jié)座5的內(nèi)孔是錐形的。錐形軸套4在軸向有槽口,如圖10-3-4所示。當(dāng)雙眼螺母1向里旋進(jìn)時,將錐形套向里頂,使錐形套在前進(jìn)時,槽口變小,內(nèi)孔收縮,將齒桿10夾得更緊,加大了齒輪轉(zhuǎn)動的摩擦阻力,從而制止自動下降。

【使用方法】
■低倍鏡的使用方法

(1)取鏡和放置:顯微鏡平時存放在柜或箱中,用時從柜中取出,右手緊握鏡臂,左一手托住鏡座,將顯微鏡放在自己左肩前方的實(shí)驗(yàn)臺上,鏡座后端距桌邊1-2寸為宜,便于坐著操作。

(2)對光:用拇指和中指移動旋轉(zhuǎn)器(切忌手持物鏡移動),使低倍鏡對準(zhǔn)鏡臺的通光孔(當(dāng)轉(zhuǎn)動聽到碰叩聲時,說明物鏡光軸已對準(zhǔn)鏡筒中心)。打開光圈,上升集光器,并將反光鏡轉(zhuǎn)向光源,以左眼在目鏡上觀察(右眼睜開),同時調(diào)節(jié)反光鏡方向,直到視野內(nèi)的光線均勻明亮為止。

(3)放置玻片標(biāo)本:取一玻片標(biāo)本放在鏡臺上,一定使有蓋玻片的一面朝上,切不可放反,用推片器彈簧夾夾住,然后旋轉(zhuǎn)推片器螺旋,將所要觀察的部位調(diào)到通光孔的正中。

(4)調(diào)節(jié)焦距:以左手按逆時針方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器,使鏡臺緩慢地上升至物鏡距標(biāo)本片約5毫米處,應(yīng)注意在上升鏡臺時,切勿在目鏡上觀察。一定要從右側(cè)看著鏡臺上升,以免上升過多,造成鏡頭或標(biāo)本片的損壞。然后,兩眼同時睜開,用左眼在目鏡上觀察,左手順時針方向緩慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器,使鏡臺緩慢下降,直到視野中出現(xiàn)清晰的物象為止。

如果物象不在視野中心,可調(diào)節(jié)推片器將其調(diào)到中心(注意移動玻片的方向與視野物象移動的方向是相反的)。如果視野內(nèi)的亮度不合適,可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調(diào)節(jié),如果在調(diào)節(jié)焦距時,鏡臺下降已超過工作距離(>5.40mm)而未見到物象,說明此次操作失敗,則應(yīng)重新操作,切不可心急而盲目地上升鏡臺。

■高倍鏡的使用方法

(1)選好目標(biāo):一定要先在低倍鏡下把需進(jìn)一步觀察的部位調(diào)到中心,同時把物象調(diào)節(jié)到*清晰的程度,才能進(jìn)行高倍鏡的觀察。

(2)轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器,調(diào)換上高倍鏡頭,轉(zhuǎn)換高倍鏡時轉(zhuǎn)動速度要慢,并從側(cè)面進(jìn)行觀察(防止高倍鏡頭碰撞玻片),如高倍鏡頭碰到玻片,說明低倍鏡的焦距沒有調(diào)好,應(yīng)重新操作。

(3)調(diào)節(jié)焦距:轉(zhuǎn)換好高倍鏡后,用左眼在目鏡上觀察,此時一般能見到一個不太清楚的物象,可將細(xì)調(diào)節(jié)器的螺旋逆時針移動約0.5-1圈,即可獲得清晰的物象(切勿用粗調(diào)節(jié)器!)

如果視野的亮度不合適,可用集光器和光圈加以調(diào)節(jié),如果需要更換玻片標(biāo)本時,必須順時針(切勿轉(zhuǎn)錯方向)轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡臺下降,方可取下玻片標(biāo)本。

【注意事項(xiàng)】
■持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢,不可單手提取,以免零件脫落或碰撞到其它地方。

■輕拿輕放,不可把顯微鏡放置在實(shí)驗(yàn)臺的邊緣,以免碰翻落地。

■保持顯微鏡的清潔,光學(xué)和照明部分只能用擦鏡紙擦拭,切忌口吹手抹或用布擦,機(jī)械部分用布擦拭。

■水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺,如果沾污應(yīng)立即擦凈。

■放置玻片標(biāo)本時要對準(zhǔn)通光孔中央,且不能反放玻片,防止壓壞玻片或碰壞物鏡。

■要養(yǎng)成兩眼同時睜開的習(xí)慣,以左眼觀察視野,右眼用以繪圖。

■不要隨意取下目鏡,以防止塵土落入物鏡,也不要任意拆卸各種零件,以防損壞。

■使用完畢后,必須復(fù)原才能放回鏡箱內(nèi),其步驟是:取下標(biāo)本片,轉(zhuǎn)動旋轉(zhuǎn)器使鏡頭離開通光孔,下降鏡臺,平放反光鏡,下降集光器(但不要接觸反光鏡)、關(guān)閉光圈,推片器回位,蓋上綢布和外罩,放回實(shí)驗(yàn)臺柜內(nèi)。*后填寫使用登記表。(注:反光鏡通常應(yīng)垂直放,但有時因集光器沒提至應(yīng)有高度,鏡臺下降時會碰壞光圈,所以這里改為平放)

【儀器分類】

顯微鏡分光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡。
■光學(xué)顯微鏡
它是在1590年由荷蘭的楊森父子所首創(chuàng)?,F(xiàn)在的光學(xué)顯微鏡可把物體放大1500倍,分辨的*小極限達(dá)0.2微米。光學(xué)顯微鏡的種類很多,除一般的外,主要有暗視野顯微鏡一種具有暗視野聚光鏡,從而使照明的光束不從中央部分射入,而從四周射向標(biāo)本的顯微鏡.熒光顯微鏡以紫外線為光源,使被照射的物體發(fā)出熒光的顯微鏡。

■電子顯微鏡
它是在1931年在德國柏林由克諾爾和哈羅斯卡首先裝配完成的。這種顯微鏡用高速電子束代替光束。由于電子流的波長比光波短得多,所以電子顯微鏡的放大倍數(shù)可達(dá)80萬倍,分辨的*小極限達(dá)0.2納米。1963年開始使用的掃描電子顯微鏡更可使人看到物體表面的微小結(jié)構(gòu)。

【儀器的歷史】
早在公元前一世紀(jì),人們就已發(fā)現(xiàn)通過球形透明物體去觀察微小物體時,可以使其放大成像。后來逐漸對球形玻璃表面能使物體放大成像的規(guī)律有了認(rèn)識。

1590年,荷蘭和意大利的眼鏡制造者已經(jīng)造出類似顯微鏡的放大儀器。
1611年
Kepler(克卜勒):提議復(fù)合式顯微鏡的制作方式。
1655年
Hooke(虎克):「細(xì)胞」名詞的由來便由虎克利用復(fù)合式顯微鏡觀察軟木塞上某區(qū)域中的微小氣孔而得來的。
1674年
Leeuwenhoek(李文赫克):發(fā)現(xiàn)原生動物學(xué)的報(bào)導(dǎo)問世,并于九年后成為首位發(fā)現(xiàn)「細(xì)菌」存在的人。
1833年
Brown(布朗):在顯微鏡下觀察紫羅蘭,隨后發(fā)表他對細(xì)胞核的詳細(xì)論述。
1838年
Schlieden and Schwann(雪萊敦及史汪):皆提倡細(xì)胞學(xué)原理,其主旨即為「有核細(xì)胞是所有動植物的組織及功能之基本元素」。
1857年
Kolliker(寇利克):發(fā)現(xiàn)肌肉細(xì)胞中之粒線體。
1876年
Abbe(阿比):剖析影像在顯微鏡中成像時所產(chǎn)生的繞射作用,試圖設(shè)計(jì)出*理想的顯微鏡。
1879年
Flrmming(佛萊明):發(fā)現(xiàn)了當(dāng)動物細(xì)胞在進(jìn)行有絲分裂時,其染色體的活動是清晰可見的。
1881年
Retziue(芮祖):動物組織報(bào)告問世,此項(xiàng)發(fā)表在當(dāng)世尚無人能凌駕逾越。然而在20年后,卻有以Cajal(卡嘉爾)為首的一群組織學(xué)家發(fā)展出顯微鏡染色觀察法,此舉為日后的顯微解剖學(xué)立下了基礎(chǔ)。
1882年
Koch(寇克):利用苯安染料將微生物組織進(jìn)行染色,由此他發(fā)現(xiàn)了霍亂及結(jié)核桿菌。往后20年間,其它的細(xì)菌學(xué)家,像是Klebs and Pasteur(克萊柏和帕斯特)則是藉由顯微鏡下檢視染色藥品而證實(shí)許多疾病的病因。
1886年
Zeiss(蔡氏):打破一般可見光理論上的極限,他的發(fā)明--阿比式及其它一系列的鏡頭為顯微學(xué)者另辟一新的解像天地。
1898年
Golgi(高爾基):首位發(fā)現(xiàn)細(xì)菌中高爾基體的顯微學(xué)家。他將細(xì)胞用硝酸銀染色而成就了人類細(xì)胞研究上的一大步。
1924年
Lacassagne(蘭卡辛):與其實(shí)驗(yàn)工作伙伴共同發(fā)展出放射線照相法,這項(xiàng)發(fā)明便是利用放射性釙元素來探查生物標(biāo)本。
1930年
Lebedeff(萊比戴衛(wèi)):設(shè)計(jì)并搭配**架干涉顯微鏡。另外由Zernicke(卓尼柯)在1932年發(fā)明出相位差顯微鏡,兩人將傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡延伸發(fā)展出來的相位差觀察使生物學(xué)家得以觀察染色活細(xì)胞上的種種細(xì)節(jié)。
1941年
Coons(昆氏):將抗體加上螢光染劑用以偵測細(xì)胞抗原。
1952年
Nomarski(諾馬斯基):發(fā)明干涉相位差光學(xué)系統(tǒng)。此項(xiàng)發(fā)明不僅享有**權(quán)并以***本人命名之。
1981年
Allen and Inoue(艾倫及艾紐):將光學(xué)顯微原理上的影像增強(qiáng)對比,發(fā)展趨于**境界。
1988年
Confocal(共軛焦)掃瞄顯微鏡在市場上被廣為使用。

【幾種特殊顯微鏡簡介】
■暗視野顯微鏡
暗視野顯微鏡由于不將透明光射入直接觀察系統(tǒng),無物體時,視野暗黑,不可能觀察到任何物體,當(dāng)有物體時,以物體衍射回的光與散射光等在暗的背景中明亮可見。在暗視野觀察物體,照明光大部分被折回,由于物體(標(biāo)本)所在的位置結(jié)構(gòu),厚度不同,光的散射性,折光等都有很大的變化。

■相位差顯微鏡
相位差顯微鏡的結(jié)構(gòu):
相位差顯微鏡,是應(yīng)用相位差法的顯微鏡。因此,比通常的顯微鏡要增加下列附件:
(1) 裝有相位板(相位環(huán)形板)的物鏡,相位差物鏡。
(2) 附有相位環(huán)(環(huán)形縫板)的聚光鏡,相位差聚光鏡。
(3) 單色濾光鏡-(綠)。
各種元件的性能說明
(1) 相位板使直接光的相位移動 90°,并且吸收減弱光的強(qiáng)度,在物鏡后焦平面的適當(dāng)位置裝置相位板,相位板必須確保亮度,為使衍射光的影響少一些,相位板做成環(huán)形狀。
(2) 相位環(huán)(環(huán)狀光圈)是根據(jù)每種物鏡的倍率,而有大小不同,可用轉(zhuǎn)盤器更換。
(3) 單色濾光鏡系用中心波長546nm(毫微米)的綠色濾光鏡。通常是用單色濾光鏡入觀察。相位板用特定的波長,移動90°看直接光的相位。當(dāng)需要特定波長時,必須選擇適當(dāng)?shù)臑V光鏡,濾光鏡插入后對比度就提高。此外,相位環(huán)形縫的中心,必須調(diào)整到正確方位后方能操作,對中望遠(yuǎn)鏡就是起這個作用部件。

■視頻顯微鏡
將傳統(tǒng)的顯微鏡與攝象系統(tǒng),顯示器或者電腦相結(jié)合,達(dá)到對被測物體的放大觀察的目的。

*早的雛形應(yīng)該是相機(jī)型顯微鏡,將顯微鏡下得到的圖像通過小孔成象的原理,投影到感光照片上,從而得到圖片?;蛘咧苯訉⒄障鄼C(jī)與顯微鏡對接,拍攝圖片。隨著CCD攝象機(jī)的興起,顯微鏡可以通過其將實(shí)時圖像轉(zhuǎn)移到電視機(jī)或者監(jiān)視器上,直接觀察,同時也可以通過相機(jī)拍攝。80年代中期,隨著數(shù)碼產(chǎn)業(yè)以及電腦業(yè)的發(fā)展,顯微鏡的功能也通過它們得到提升,使其向著更簡便更容易操作的方面發(fā)展。到了90年代末,半導(dǎo)體行業(yè)的發(fā)展,晶圓要求顯微鏡可以帶來更加配合的功能,硬件與軟件的結(jié)合,智能化,人性化,使顯微鏡在工業(yè)上有了更大的發(fā)展。

熒光顯微鏡
在螢光顯微鏡上,必須在標(biāo)本的照明光中,選擇出特定波長的激發(fā)光,以產(chǎn)生螢光,然后必須在激發(fā)光和螢光混合的光線中,單把螢光分離出來以供觀察。因此,在選擇特定波長中,濾光鏡系統(tǒng),成為極其重要的角色。
螢光顯微鏡原理:
(A) 光源:光源幅射出各種波長的光(以紫外至紅外)。
(B) 激勵濾光源:透過能使標(biāo)本產(chǎn)生螢光的特定波長的光,同時阻擋對激發(fā)螢光無用的光。
(C) 螢光標(biāo)本:一般用螢光色素染色。
(D) 阻擋濾光鏡:阻擋掉沒有被標(biāo)本吸收的激發(fā)光有選擇地透射螢光,在螢光中也有部分波長被選擇透過。

偏光顯微鏡
偏光顯微鏡是用于研究所謂透明與不透明各向異性材料的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質(zhì),在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色法來進(jìn)行觀察,但有些則不可能,而必須利用偏光顯微鏡。
(1)偏光顯微鏡的特點(diǎn)
將普通光改變?yōu)槠窆膺M(jìn)行鏡檢的方法,以鑒別某一物質(zhì)是單折射(各向同行)或雙折射性(各向異性)。雙折射性是晶體的基本特性。因此,偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物、化學(xué)等領(lǐng)域,在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用。
(2)偏光顯微鏡的基本原理
偏光顯微鏡的原理比較復(fù)雜,在此不作過多介紹,偏光顯微鏡必須具備以下附件:起偏鏡,檢偏鏡,補(bǔ)償器或相位片,專用無應(yīng)力物鏡,旋轉(zhuǎn)載物臺。

■超聲波顯微鏡
超聲波掃描顯微鏡的特點(diǎn)在于能夠精確的反映出聲波和微小樣品的彈性介質(zhì)之間的相互作用,并對從樣品內(nèi)部反饋回來的信號進(jìn)行分析!圖像上(C-Scan)的每一個象素對應(yīng)著從樣品內(nèi)某一特定深度的一個二維空間坐標(biāo)點(diǎn)上的信號反饋,具有良好聚焦功能的Z.A傳感器同時能夠發(fā)射和接收聲波信號。一副完整的圖像就是這樣逐點(diǎn)逐行對樣品掃描而成的。反射回來的超聲波被附加了一個正的或負(fù)的振幅,這樣就可以用信號傳輸?shù)臅r間反映樣品的深度。用戶屏幕上的數(shù)字波形展示出接收到的反饋信息(A-Scan)。設(shè)置相應(yīng)的門電路,用這種定量的時間差測量(反饋時間顯示),就可以選擇您所要觀察的樣品深度。

■解剖顯微鏡
解剖顯微鏡,又被稱為實(shí)體顯微鏡或立體顯微鏡,是為了不同的工作需求所設(shè)計(jì)的顯微鏡。利用解剖顯微鏡觀察時,進(jìn)入兩眼的光各來自一個獨(dú)立的路徑,這兩個路徑只夾一個小小的角度,因此在觀察時,樣品可以呈現(xiàn)立體的樣貌。解剖顯微鏡的光路設(shè)計(jì)有兩種: The Greenough Concept和The Telescope Concept。解剖顯微鏡常常用在一些固體樣本的表面觀察,或是解剖、鐘表制作和小電路板檢查等工作上。

■醫(yī)學(xué)和生物學(xué)常使用的光學(xué)顯微鏡
有下列12種:
暗視野顯微鏡 在普通光學(xué)顯微鏡臺下配一個暗視野聚光器(圖4),來自下面光源的光線被拋物面聚光器反射,形成了橫過顯微鏡視野而不進(jìn)入物鏡的強(qiáng)烈光束。因此視野是暗的,視野中直徑大于 0.3m的微粒將光線散射,其大小和形態(tài)可清楚看到。甚至可看到普通明視野顯微鏡中看不見的幾個毫微米的微粒。因此在某些細(xì)菌、細(xì)胞等活體檢查中常常使用。

■場發(fā)射掃描電子顯微鏡
主要用途: 該儀器具有超高分辨率,能做各種固態(tài)樣品表面形貌的二次電子象、反射電子象觀察及圖像處理。 具有高性能x射線能譜儀,能同時進(jìn)行樣品表層的微區(qū)點(diǎn)線面元素的定性、半定量及定量分析,具有形貌、化學(xué)組分綜合分析能力。
儀器類別: 03040702 /儀器儀表 /光學(xué)儀器 /電子光學(xué)及離子光學(xué)儀器
指標(biāo)信息: 二次電子象分辨率:1.5nm 加速電壓:0~30kV 放大倍數(shù):10-50萬倍連續(xù)可調(diào)工作距離:5~35mm連續(xù)可調(diào)傾斜:-5°~45° x射線能譜儀: 分辨率:133eV 分析范圍:B-U
附件信息: 鍍金鍍炭儀 ISIS圖像處理系統(tǒng)背散射探頭
場發(fā)射掃描電鏡,由于分辨率高,為納米材料的研究提供了可靠的實(shí)驗(yàn)手段。另外,對半導(dǎo)體材料和絕緣體,都能得到滿意的圖像,對超導(dǎo)薄膜,磁性材料,分子束外延生長的薄膜材料,半導(dǎo)體材料進(jìn)行了形貌觀察,并對多種材料進(jìn)行了微區(qū)成份分析,均能得到滿意的結(jié)果

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【責(zé)任編輯】微儀顯微鏡

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